曲克芦丁（Troxerutin）是一种天然黄酮类化合物，广泛存在于多种植物中，具有显著的抗氧化、抗炎和血管保护作用。近年来，研究发现曲克芦丁能与多种蛋白质发生特异性结合，这一特性使其在蛋白质检测领域展现出重要应用价值。牛血清白蛋白（BSA）作为生物医学研究中常用的模式蛋白，其准确测定对于药物开发、临床诊断和基础研究具有重要意义。

传统蛋白质浓度测定方法（如Lowry法、Bradford法）存在操作复杂、灵敏度不足等问题。本研究建立了一种基于曲克芦丁与BSA结合后荧光特性变化的快速检测方法，该方法具有操作简便、灵敏度高、抗干扰能力强等优势，为蛋白质浓度测定提供了一种新的技术选择。

实验原理
曲克芦丁与BSA通过疏水作用或范德华力结合形成复合物，导致BSA内源荧光（主要由色氨酸残基贡献）发生显著猝灭。通过同步荧光光谱法检测荧光强度的降低程度，可建立荧光强度与BSA浓度的定量关系。

实验步骤
试剂配制
缓冲体系：pH 7.4的磷酸盐缓冲液（含0.1 mol/L NaCl维持离子强度）
曲克芦丁溶液：浓度6.0×10⁻⁴ mol/L，避光保存
BSA储备液：浓度6.0×10⁻⁶ mol/L，现用现稀释
样品处理
在10 mL量瓶中依次加入2.0 mL缓冲液、2.0 mL NaCl溶液、0.5 mL曲克芦丁溶液及不同体积的BSA溶液，定容后混匀
避光静置10分钟，确保结合反应充分进行
光谱检测
仪器参数设置：
激发波长290 nm
发射波长扫描范围300-500 nm
狭缝宽度3 nm
Δλ（波长间距）设置为15 nm（同步荧光模式）
信号记录：固定激发与发射波长差，扫描同步荧光光谱，记录339 nm处的荧光强度
数据分析
线性范围：BSA浓度在0.5×10⁻⁶ ~7.5×10⁻⁶ mol/L范围内，荧光强度与浓度呈线性正相关（相关系数r>0.999）
检测限：最低检测限达微摩尔级别（约0.1×10⁻⁶ mol/L），适合痕量分析
精密度：日内和日间相对标准偏差（RSD）分别小于3.38%和4.94%，回收率97.3%~102.9%
方法优势
灵敏度高：比传统Lowry法、Bradford法更适用于低浓度BSA检测
抗干扰强：同步荧光技术可减少散射光影响，尤其适用于含复杂成分的生物样本（如血清）
操作简便：无需复杂标记或分离步骤，30分钟内完成检测
应用场景
该方法可用于：

药物研发中蛋白质-药物相互作用研究
临床实验室检测患者血清白蛋白水平（如肾病、肝病诊断）
注意事项：

避免强氧化剂或金属离子干扰
控制反应温度在25±2℃以保证结果稳定性
对于复杂生物样本，建议进行适当的前处理