一、固定操作基本原则

伦理遵循
实验方案需通过IACUC审批（参考《实验动物福利伦理审查指南》GB/T 35892-2018）
遵循最小化应激原则，单次固定时间≤3分钟
生物安全
佩戴防咬手套（厚度≥0.5mm丁腈材质）
实验台铺设防滑垫（硅胶材质，减少动物挣扎）

二、小鼠固定技术规范

1. 徒手保定（适用于短时操作，如皮下注射）

操作步骤：

右手提尾根部，将小鼠置于粗糙表面（如笼盖）
快速用左手拇指和食指夹住颈背部皮肤，形成"帐篷状"固定
小指与无名指轻压尾部，使身体呈直线（图1-A）
关键参数：

颈皮抓握力：50-100g（以不阻断呼吸为限）
体位角度：身体纵轴与台面呈30°
适用场景：灌胃、眼球取血、短时测量

2. 固定器使用（适用于长时间操作，如尾静脉注射）

设备选择：

有机玻璃筒状固定器（直径3cm，长度12cm）
可调节式小鼠固定板（带四肢固定带）
操作流程：

将小鼠头朝向固定器入口缓慢推入
调整尾部固定夹，暴露目标部位（如尾静脉）
监测呼吸频率（正常值：140-210次/分钟）

三、大鼠固定技术规范

1. 徒手保定（适用于基础操作）

操作步骤：

右手戴防咬手套，从背部抓握尾根部
左手呈"C"形包裹大鼠肩胸部，拇指与食指扣住下颌骨
前臂轻压躯干，限制后肢活动（图2-B）
力学控制点：

下颌骨压力：200-300g（防止挣脱且不损伤颞颌关节）
尾部牵引力：≤10%体重
适用场景：腹腔注射、耳标打孔

2. 立体定位仪固定（适用于神经科学研究）

设备要求：

大鼠颅骨适配器（耳杆直径3.5mm）
恒温垫维持体温36.5-37.5℃
操作流程：

深度麻醉后（乌拉坦1.2g/kg），门齿钩固定上颌
耳杆插入外耳道，三点式固定颅骨
调节俯仰角（Bregma与Lambda等高）
精度验证：

颅骨位移容差：≤0.1mm
固定时间限制：≤2小时
四、特殊状态动物固定策略

1. 孕鼠固定

腹部支撑：使用V形槽固定板，避免压迫子宫
最大仰卧时间：≤5分钟（防止腔静脉压迫）
2. 攻击性个体处理

镇静预处理：吸入2%异氟烷30秒诱导镇静
防咬口罩：3D打印定制化口套（图3-C）
五、操作质量评估标准

指标 小鼠标准 大鼠标准
固定成功率 ≥95% ≥90%
表皮损伤率 ≤5% ≤8%
应激反应（皮质醇） ≤基础值1.5倍 ≤基础值2倍
单次操作时间 ≤30秒 ≤45秒
六、常见错误与纠正

气管压迫
表现：发绀、呼吸频率＞250次/分（小鼠）
纠正：放松颈背部抓握，改为筒状固定器
脊柱过伸
表现：后肢瘫痪（常见于大鼠错误保定）
预防：保持脊椎自然曲度，避免尾部过度牵拉
七、培训认证体系

初级认证：连续20次操作无并发症
高级认证：能在15秒内完成攻击性大鼠固定附录

通过规范化的固定技术，可在确保动物福利的前提下提高实验可重复性，相关操作需在监督员指导下完成前10次实操训练。