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怎样选择色谱柱

发布日期:2019-04-28 
在现代高效液相色谱(HPLC)中，色谱填料的选择在很大程度上取决于色谱填料的选择。然而，色谱填料的选择范围很广，要做出适当的选择，必须对此有一定的了解。填料一般分为硅胶基填料，聚合物填料与其他无机填料
 
硅胶基填料
 
1.正常相色谱
 
在正常相色谱中使用的固定相通常是硅胶(Silica)，以及其他具有极性官能团的相填料，如胺基(NH2，APS)和氰基(CN，CPS)。由于Silica表面硅羟基(SiOH)等基团的强极性，分离顺序是根据样品中各组分的极性大小而定，即先将强组分和弱组分的极性冲刷掉。
 
流动相极性低于正乙烷(Hexane)、Chloroform(Chloroform)、二氯甲烷(MethyleneChloride)等固定相。
 
2.反相色谱
 
反相色谱填料通常以硅胶为基础，键合相表面存在相对较弱的极性官能团。反相色谱所用的流动相极性较强，通常是水、缓冲液和甲醇、己酸等的混合物。
 
从柱中流出样品的顺序是，较强的极性组合是第一个被洗掉的，而较弱的极性组分在柱上的保留能力较强。
 
常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。
 
 
二、聚合物填料
 
大多数聚合物调味品为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚丙酸甲酯，其主要优点是可在PH值为1～14时使用。与基于硅胶的C18填料相比，这些填料具有更强的疏水性；大孔聚合物填料对蛋白质和其他样品的分离非常有效。
 
聚合物填料的缺点是柱效率低于硅胶基填料。
 
三、其他无机填料
 
其他HPLC无机填料柱也已商业化。由于其特殊性，一般只限于特殊目的。例如，石墨化碳也被用作反色谱填料。石墨化碳的表面是保持的基础，不需要其他的表面改性。柱填料一般优于烷基键合硅胶或多孔聚合物填料。石墨化碳可以用来分离一些几何导体，因为HPLC流动相不会被溶解，这种柱可以在任何PH和任何温度下使用。氧化铝也可用于高效液相色谱法，氧化铝颗粒具有较强的刚性，可制成稳定的柱床。其优点是可用于PH高达12的流动相。但由于氧化铝与碱性化合物的相互作用较强，应用范围有限，因此新型的氧化锆填料也可用于高效液相色谱法，商业多孔氧化锆微球柱仅适用于聚合物涂层，新型的氧化锆填料也只适用于聚合物涂层的多孔氧化锆微球柱。当PH值为1～14时，温度可达100℃。经过多年的研究和实验的困难，氧化锆填料的重要用途和优势仍在进行中。

最后更新:2019-04-28