总蛋白提取试剂盒

　　产品组成：

产品组成 310003 310004
规格 50 assays 100 assays
总蛋白提取液 25ml 50ml
蛋白酶抑制剂混合物 100ul 200ul
储存条件：

　　蛋白酶抑制剂-20℃保存； 蛋白提取液2-8℃保存。

　　有效期：

　　一年。

　　注意事项：

　　● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

　　● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

　　● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

　　● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

　　● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

　　产品简介：

　　贝博总蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

　　试剂盒以外自备试剂和仪器

　　● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管

　　● 涡旋振荡器 ● 冰箱，冰盒

　　使用方法：

　　使用注意事项：

　　5. Western实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、Tubulin。

　　6. 更多蛋白提取常见问题分析等资料可以联系贝博公司索取。

　　细胞总蛋白提取：

　　1. 提取液制备：每500ul冷的总蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

　　2. 取5-10×10个细胞，在4℃，1000rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

　　3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

　　4. 每5×10个细胞中加入500ul冷的总蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。

　　5. 在4℃，14000rpm条件下离心15分钟。

　　6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

　　7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

　　注：

　　① 细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。

　　② 建议用BCA法进行蛋白定量。

　　③ 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

　　组织总蛋白提取：

　　1. 提取液制备：每500ul冷的总蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

　　2. 取100mg组织样本剪碎，加入总蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。

　　3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃，10000rpm条件下离心5分钟。

　　4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

　　5. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

　　注：

　　① 用液氮研磨的方法更佳，具体方法可以联系我们。