纤维素酶R-10

1.不同酶液组合对椪柑原生质体分离的影响
摘要：以椪柑愈伤组织和试管苗叶片为试验材料,采用纤维素酶R-10+离析酶R-10的酶液组合Ⅰ和纤维素酶Worthington+离析酶R-10的酶液组合Ⅱ进行原生质体的分离,比较这2种酶液组合对原生质体的酶解时间、产量及活性氧含量的影响.结果表明,酶液组合Ⅱ所需的酶解时间均短于酶液组合Ⅰ;酶液组合Ⅱ所获得的原生质体产量均高于酶液组合Ⅰ,在愈伤组织中前者产量是后者的9.09倍,在叶片中前者产量是后者的5.29倍,差异显著;酶液组合Ⅰ的愈伤组织原生质体的活性氧水平是酶液组合Ⅱ的1.96倍,且差异显著,而对于叶肉原生质体,2种酶液组合之间的差异不显著.因此可见,酶液组合Ⅱ更适合用于椪柑原生质体的分离.
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2.花椒原生质体分离与培养研究
摘要：以花椒试管苗叶片、愈伤组织和悬浮细胞为试验材料,通过单因素试验研究酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离的影响,并以花椒试管苗叶片分离出的原生质体为试验材料,研究培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响.结果表明,酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离有显著影响.在适宜条件下,用甘露醇作花椒原生质体分离的渗透压调节剂,浓度在0.6～0.7 mol·L-1时分离效果最佳.以花椒叶片为原生质体分离材料的最佳酶液组成为CPW-O.7 mol·L-1甘露醇+1.0％(w/v)纤维素酶R-10+ 1.5％(w/v)果胶酶,酶解时间为10 h,纯化后的原生质体产量和活力分别可达82.36×105个·g-1和72.74％.以愈伤组织和悬浮细胞为分离材料的最佳酶液组成均为CPW-0.6 mol·L-1甘露醇+2.0％(w/v)纤维素酶R-10+0.5％(w/v)果胶酶,酶解12～14 h,纯化后的原生质体产量及活力分别为31.26×105个·g-1、59.15％和53.87×105个·g-1、63.92％.以花椒试管苗叶片为原生质体分离材料,分离纯化后的花椒原生质体在无激素的WPM培养基中,培养密度为1×105个·mL-1,培养第3天原生质体第1次分裂,2周分裂3～5次,原生质体28 d后形成微细胞团,培养60 d后可形成2 mm左右的愈伤组织.
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