传代培养法

原理

细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

材料和试剂

1.细胞：贴壁细胞株

2.试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）

3.仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等

操作步骤

1.吸除培养瓶内旧培养液。

2.向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。

3.置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。

4.吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液。

5.用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。

6.计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。

原理

细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

材料和试剂

1.细胞：贴壁细胞株

2.试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）

3.仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等

操作步骤

1.吸除培养瓶内旧培养液。

2.向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。

3.置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。

4.吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液。

5.用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。

6.计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。